簡要描述:定量蛋白組學服務依據(jù)細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩(wěn)定同位素標記(13C、15N、2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質(zhì)組進行代謝標記的方法
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定量蛋白組學服務背景簡介:
SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術(shù)是依據(jù)細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩(wěn)定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質(zhì)組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩(wěn)定同位素,沒有放射性,因此可以在常規(guī)條件下進行試驗。
定量蛋白組學服務
Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C,15N,2H)等穩(wěn)定同位素標記的R、K、L加入細胞培養(yǎng)基中,在細胞進行蛋白質(zhì)合成時,這些穩(wěn)定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質(zhì)中。通過>6代的細胞增殖,整個細胞的蛋白質(zhì)組會被穩(wěn)定同位素氨基酸”標記”;SILAC“標記”了蛋白質(zhì)與“未標記”的蛋白質(zhì)(普通培養(yǎng)基培養(yǎng))存在數(shù)目的質(zhì)量差異,該質(zhì)量差異在后續(xù)LC-MS的一級質(zhì)譜( MSl)中呈現(xiàn)一對同位素質(zhì)譜峰,通過質(zhì)譜峰的信號強度能實現(xiàn)對2組樣品中每一個蛋白質(zhì)表達水平的相對定量,終能確定蛋白質(zhì)表達水平差異(差異蛋白質(zhì)組學分析)和區(qū)分特異性和非特異性相互作用(蛋白質(zhì)相互作用分析);同時通過二級質(zhì)譜( MS/MS,MS2)實現(xiàn)對樣品中蛋白質(zhì)的鑒定。
SILAC技術(shù)結(jié)合LC-MS能同時實現(xiàn)對2組樣品中蛋白質(zhì)的定性和定量分析。實驗技術(shù)“高、大、上“,定量,通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質(zhì)表達水平差異,便于快速找到感興趣的目標分子。同時,利用SILAC技術(shù),能明顯提高文章的檔次。
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