簡要描述:chip-seq蛋白技術(shù)服務(wù)染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)主要應(yīng)用于驗證及探尋體內(nèi)環(huán)境中,蛋白質(zhì)和DNA的直接相互作用,旨在探索特定蛋白質(zhì)在DNA上的特定序列
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
chip-seq蛋白技術(shù)服務(wù)
chip-seq蛋白技術(shù)服務(wù)簡單介紹: 染色質(zhì)免疫共沉淀:染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)主要應(yīng)用于驗證及探尋體內(nèi)環(huán)境中,蛋白質(zhì)和DNA的直接相互作用,旨在探索特定蛋白質(zhì)在DNA上的特定結(jié)合序列,常在研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及組蛋白修飾中被應(yīng)用到。
實驗過程大致為:交聯(lián)-解交聯(lián)-超聲打碎-免疫沉淀-洗滌-DNA純化-PCR檢測。
具體操作:
樣品準(zhǔn)備:培養(yǎng)細(xì)胞(若樣品為組織,可先培養(yǎng)原代細(xì)胞);固定,或者直接活細(xì)胞送樣。
細(xì)胞固定:此步驟目的為將結(jié)合在DNA上的蛋白用共價形式交聯(lián)在所結(jié)合的位點上,避免在之后的操作步驟中脫離丟失。直接將甲醛加入細(xì)胞培養(yǎng)液,搖晃固定10分鐘后,迅速加入2.5M甘氨酸解交聯(lián)5分鐘,PBS洗滌,刮下細(xì)胞。
超聲打碎:此步驟目的為將長鏈的DNA打碎成200-1000bp的DNA的片段。使用設(shè)備是超聲水浴鍋,EP管在冰水混合物中超聲,超聲后細(xì)胞懸液變得澄清透明。離心取上清。
免疫沉淀:此步驟是加入特異性抗體和對照IgG,和結(jié)合抗體的磁珠(或protein A/G)。經(jīng)稀釋后,超聲產(chǎn)物分成兩份,分別加入特異性抗體和對照IgG,輪轉(zhuǎn)過液,第二天加入磁珠輪轉(zhuǎn)4小時。
洗滌:此步驟是減少非特異性結(jié)合。分別用稀釋緩沖液、低鹽溶液、高鹽溶液、氯化鋰溶液以及TE緩沖液洗滌共7次。用洗脫緩沖液在65℃洗脫過液。
DNA純化:將洗脫的產(chǎn)物用DNA純化試劑盒純化,得到50ul純化產(chǎn)物,用于檢測ChIP結(jié)果。
如果您對我們的chip-seq感興趣,咨詢,我們將熱情為您服務(wù)。
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