細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過(guò)程，分為間期與分烈期兩個(gè)階段。上海伊萊博致力于臨床前藥效學(xué)CRO實(shí)驗(yàn)，多年的細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)服務(wù)的經(jīng)驗(yàn)，為廣大藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)提供保障。

更新時(shí)間：2023-10-30
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

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細(xì)胞周期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)共分以下4個(gè)主要步驟:

1.細(xì)胞鋪盤(pán)

HeLa S3細(xì)胞，密度為80%左右分盤(pán) ，使鋪盤(pán)密度在50%左右，為滿(mǎn)足流式細(xì)胞儀上機(jī)要求，細(xì)胞數(shù)目需大于1x10°/組。

2.細(xì)胞同步化處理 :

a) 加入終濃度2mM的Thymidine同步化18h

b) 用溫育的PBS洗4次，更換新鮮培養(yǎng)基，培養(yǎng)9h

c) 再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.樣品收集;

a) 分別收取釋放2h(S期)，6h(G2/M期)和12h(G1期)細(xì)胞樣品

b) 每個(gè)樣品收取都使用預(yù)冷的PBS洗滌4次，1000g離心5min，棄上清

C)100ULPBS審懸沉促，吸取出細(xì)胞懸液干移液器中，干移去細(xì)胞的管中加入900uL預(yù)冷的70%一醇，漩渦振蕩器需蕩中滴入細(xì)胞懸液。

d)4℃固定一小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。

e)1500rmp，離心10min，去固定液。

f)細(xì)胞染色液配制:50xRNaseA母液:50xPI母液:PBS=20:20:960;RNaseA母液濃度1mg/mL，工作濃度20ug/mL;PI母液濃度2.5mg/mL，工作濃度50ug/mL。

g)細(xì)胞37度染色1h。根據(jù)細(xì)胞量，加入一定體積的細(xì)胞染色液(1~1.5mL)重懸，使上機(jī)時(shí)細(xì)胞通過(guò)率為200~350Cell/s,染色液不可過(guò)多或過(guò)少，過(guò)多則細(xì)胞密度過(guò)低上機(jī)速度嚴(yán)重不足，過(guò)少則導(dǎo)致細(xì)胞粘結(jié)。

h) 300目篩網(wǎng)過(guò)濾至流式管中。

4.上機(jī)檢測(cè);

流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，計(jì)數(shù)50000個(gè)細(xì)胞。

5.同步化數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)使用ModFit軟件分析。

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