帕金森病動物模型

帕金森病動物模型

自發(fā)現(xiàn)以來，6-OHDA一直在帕金森病的臨床前研究中扮演著重要角色。由Ungerstedt和Arbuthnott在1970年共同創(chuàng)立的單側注射旋轉模型成為了在模式動物上被最為廣泛使用的帕金森模型之一。

6-羥多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）是多巴胺的羥基化衍生物，因其化學結構與DA類似，因此能夠同DA競爭攝取位點，進而被攝入胞內(nèi)。進入胞內(nèi)后，6-OHDA能夠被氧化分解，產(chǎn)生活性氧，通過MAO（單胺氧化酶）進一步產(chǎn)生氧自由基，或直接引起線粒體功能障礙，導致DA能神經(jīng)元死亡。

因其造成動物的生物化學和神經(jīng)化學損傷類似于PD，故常被用于誘導動物PD模型。

由于6-OHDA不能穿透血腦屏障，因此為了達到中樞神經(jīng)系統(tǒng)毀傷的效果，在使用6-OHDA進行帕金森造模時，需要直接注射入動物腦內(nèi)，才能損傷中樞神經(jīng)元。

通過使用腦li體定wei注射技術將6-OHDA注射到前腦內(nèi)側束（其向前腦傳遞多巴胺能和5-羥色胺能投射）或紋狀體靶向黑質(zhì)紋狀體多巴胺能途徑來獲得帕金森模型大鼠?！揪唧w的注射位點可以是黑質(zhì)致密部（substantia nigra pars compacta, SNpc）、紋狀體（striatum）或者位于二者之間的前腦內(nèi)側束（MFB）。】

可以進行單側造模與雙側造模，其中單側造模可以提高動物耐受力，并可以將正常側作為內(nèi)部控制組與造模側進行對照研究，以便于更好地區(qū)分正常與異常運動區(qū)并評估損傷引起的運動缺陷。

帕金森病動物模型造模方法：

①SD大鼠適應一周后，腹腔麻醉，將麻醉后大鼠固定于腦li體定向儀上。

②剪開頭皮后用棉簽輕輕擦拭顱骨表面，將前囟（bregma）和后囟（lambda）點暴露出來。

③調(diào)節(jié)立li定wei儀，將前囟和后囟點的高度調(diào)節(jié)到一致。以前囟（Bregma）點為原點，找到注射位點所在的坐標

④用顱骨zuan沿注射坐標位點鉆孔，以保證微量注射器進針時不碰到孔壁。使用微量注射器吸取6-OHDA（注意避光），緩慢插入注射位點，以0.5ul/min的速度將6-OHDA注射到目標腦區(qū)，注射劑量為4μl。

帕金森病動物模型驗證：

由于動物行為特異性差異，判斷大鼠帕金森病模型是否成功，通常以動物出現(xiàn)旋轉行為的次數(shù)為標準，一般超過7轉/min即為成功的帕金森病模型，否則為不成功模型。

這類模型優(yōu)點是注射靶位選取靈活，注射劑量可調(diào)，動物行為變化穩(wěn)定可靠，檢測量化性好，多用于PD的臨床前藥物研究和藥理療效判定、神經(jīng)保護、細胞移植和基因治療等方面的研究。

缺點是①神經(jīng)元的毀損出現(xiàn)的較早，這與臨床PD病人的中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的漸進性死亡不同；②近距離的毀損很難把握毀損的程度，這使得采用這種方法獲取部分損毀的模型的成功率很低；③小鼠在異常不自主運動嚴重程度方面表現(xiàn)出較大的變異性，這會加大實驗數(shù)據(jù)的不穩(wěn)定性。